タンパク質固有の等電点によってタンパク質を分離し, 2次元分離過程でPAGEを利用して分子量別に分離する方法として、自社開発品の24cm stripを使用することで分離能力を向上させることが可能です。
Step1. 1st dimensional IEF
24cm length and non-linear IPG strip
Broad range(pH4-10), 2unit or 3unit ranges
(pH4.5-6.5 / pH4-7 / pH6-8 / pH6-9)
Step2. 2nd dimensional SDS-PAGE
24cm x 20cm x 1mm, 10-16% gradient gel
Step3. Staining
MALDI-compatible ammoniacal Silver staining (Detection limit 0.2ng/spot)
Colloidal Coomassie G-250 staining (Detection limit 1ng/spot)
SYPRO RUBY staining (Detection limit 1ng/spot)
Step4. Image Analysis
PDQuest Image Analysis Program
Step5.Statistical Analysis
Distance tree Analysis/Clustering Analysis
※2DE分析サービスは Protein Identificationサービスと連携して研究者の目的に合うPackageサービスを選択して進行することもできます。
2D MAP
Sample image
- Pig lung
- Rat Liver
- Rat Liver
- Rat Cerebrum
-
Opium poppy
(cell line) - NCI H460
- NCI H23
- Mouse Spleen
-
Human Cervical
Cancer_2CIN - Pig fillet
- Ovarian cancer tissue
- Mouse embryonic carconoma
- Mouse embryonic carconoma
- human prostatic carcinoma cell
- human plasma
- A549 cell
- Tricholoma stans
- Saccharomyces cerevisiae
- Mushroom
- Aspergillus nidulaus
- Ulva pettusa
- Rye
- Rise seeds
- Rice leaf
- cedar seeds
- calla
- Arabidopsis
- Arabidopsis WS_O_Root
- Arabidopsis Ws
- Arabidopsis Seed
- Arabidopsis Ler
- Arabidopsis Col
- Arabidopsis Chloroplast
- E. coli
- Leuconostoc mesenteroides
- Erwinia carotorora
- Brucella abortus
- Xanthomonas oryzae
- Vibrio vulnificus
- Campylo bacteria
- Pseudomonas chloroaphis
- Pseudomonas chloroaphis 2
- H. pyroli 2
- H. pyroli
- Bee venome
- Prorocentrum micans
- Prorocentrum micans
サービスの詳細
サービス番号 | サービス名 | 区分 | 納期(営業日) |
---|---|---|---|
D3010 | Silver Stained 2-DE Gel Plus Spot Quantification |
B | 7~10 |
D3011 | Coomassie Blue Stained 2-DE Gel Plus Spot Quantification |
7~10 | |
D3012 | Sypro Ruby Stained 2-DE Gel Plus Spot Quantification |
7~10 | |
D3013 | Silver Stained 2-DE Gel Plus Expression Pattern Classification |
C | 7~10 |
D3014 | Coomassie Blue Stained 2-DE Gel Plus Expression Pattern Classification |
10~14 | |
D3015 | Sypro Ruby Stained 2-DE Gel Plus Expression Pattern Classification |
10~14 |
*納期は参考納期です。諸事情により、前後する場合がございます。納期の詳細については個別にお問い合わせください。
*分析アイテムについての詳細はサービスカタログをご参照ください。
日本窓口 : (株)バイオ (www.bio-co.com) /mail: info@bio-co.com に御連絡ください。
サービスの流れ
必要サンプル条件
1. 4X SDS sample bufferを調製します。
*4X SDS sample buffer 組成: 250mM Tris-HCl(pH6.8), 8% SDS, 0.08% Bromophenol Blue
2. 細胞を可溶化します。
- 細胞の可溶化方法は以下の組織別手法をご参照ください。検体量は分析可否に重要ですので、必要量を必ず守ってください。
- すべての試料は常温で可溶化してから 90℃で5分間加熱後、配送に出すまで-20℃以下で保管してください。
サンプル |
必要試料量 |
可溶化法 |
動物組織 | 20mg以上 | 300ul 1X SDS sample bufferで破砕し、20分以上撹拌します。 |
植物組織 | 0.2g 以上 | 液体窒素による破砕を行った powder 0.2g を、200ul 1X SDS sample buffer に入れ20分以上撹拌します。 |
培養細胞 | 細胞数 2 x 10⁶以上 *1mg程度 | 細胞を遠心分離した後、上層液(培地成分は捨て、ペレットを PBSで2-3回 洗浄し、洗浄液を取り除いたのちに300ul 4X SDS sample bufferで20分以上可溶化します。 |
タンパク質抽出液 | 1mg程度 (Bradford法定量 | 4X SDS sample bufferをサンプル量に合わせて加えてください。 ※200ugで24cm large gelを用いた2-DEを1回実施できますが、以後の質量分析を考慮して1mg程度の量をお送りください。 |
3. 調整済みのサンプル送付は1.5mlチューブに入れて常温でお送りください。
ご注意
- 1. 特にご指定のない場合は、pH4-10NLの1次元ゲルと24cmの2次元ゲルを用いて解析を行いますが、その他のpH rangeのゲルも対応可能ですので、事前にご相談ください。
- 2. 染色はMALDI-compatible alkaline silver stainingを基本的に行いますので coomassie stainingをご希望の方はサービス依頼の際にお問い合わせください。(genomic sequencingが出来てない種につきましては後で MS分析のために必ずcoomassie stainingを行います)
- 3. 結果によらず、分析を実施したところまでの費用が発生いたします。
- 4. 塩濃度の高いサンプルは泳動パターンが乱れる可能性がございますので、サンプル調製の際にはご注意ください。
- 5. 感染性のあるサンプルは処理の際に確実に不活性化していただくよう、お願い申し上げます。
2DEサービスと Protein Identification(タンパク質同定)サービスを連携するサービスです。 2DE分析を遂行してからイメージ分析による発現変化を ±0.1 foldまで分析し、選定された spot数によってpackage別に同定分析をするアイテムです。
Step1. 1st dimensional IEF
24cm length and non-linear IPG strip
Broad range(pH4-10), 2unit or 3unit ranges
(pH4.5-6.5 / pH4-7 / pH6-8 / pH6-9)
Step2. 2nd dimensional SDS-PAGE
24cm x 20cm x 1mm, 10-16% gradient gel
Step3. Staining
MALDI-compatible ammoniacal Silver staining (Detection limit 0.2ng/spot)
Colloidal Coomassie G-250 staining (Detection limit 1ng/spot)
SYPRO RUBY staining (Detection limit 1ng/spot)
Step4. Image Analysis
PDQuest Image Analysis Program
Step5.Statistical Analysis
Distance tree Analysis/Clustering Analysis
サービスパッケージ
A format | B format | 価格(₩) | |
---|---|---|---|
Package 1 | 2DE 1-4 gels | 2DE 1-4 gels | 5,000,000 |
All spot selection | All spot selection | ||
PMF identification 66個 | MALDI-TOF/TOF 35個 | ||
Package 2 | 2DE 1-4 gels | 2DE 1-4 gels | 7,000,000 |
All spot selection | All spot selection | ||
PMF identification 100個 | MALDI-TOF/TOF 50個 | ||
Package 3 | 2DE 1-4 gels | 2DE 1-4 gels | 10,000,000 |
All spot selection | All spot selection | ||
PMF identification 150개 | MALDI-TOF/TOF 150個 |
サービスの詳細
サービス番号 | サービス名 | 納期 (営業日) | |
P1010 | Package1 A format | 2DE plus PMF | - |
P1020 | Package1 B format | 2DE plus TOF/TOF | - |
P2010 | Package2 A format | 2DE plus PMF | - |
P2020 | Package2 B format | 2DE plus TOF/TOF | - |
P3010 | Package3 A format | 2DE plus PMF | - |
P3020 | Package3 B format | 2DE plus TOF/TOF | - |